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PCR實驗分區(qū)少不了掌上離心機
發(fā)布時間：
2021-04-08
概要：
掌上離心機也可以稱為迷你離心機，用于微量實驗。
常見得應(yīng)用有：
1、全血中提取血清。
2、各種樣品提取上清液。
3、樣品快速沉降。
4、微量血細胞分離。
5、微生物樣品處理。
6、PCR實驗分區(qū)離心。
以最后一個實驗為例，
了解PCR實驗分區(qū)就要先了解氣溶膠，氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系，在氣體與液體面摩擦?xí)r，操作時比較劇烈地搖動反應(yīng)管，離心機離心，擴增后PCR產(chǎn)物開蓋時、吸樣時及移液器槍反復(fù)吹吸樣品時都可形成氣溶膠而污染。
綜上所述，為了得到好的實驗結(jié)果，PCR反應(yīng)需要進行嚴格的實驗分區(qū)：
常規(guī)需要設(shè)置3個獨立的分區(qū)：試劑耗材儲存與準備區(qū)、樣品處理和樣品制備區(qū)，擴增檢測區(qū)，各區(qū)域空間完全獨立；實驗室實施空氣流向控制，擴增前和擴增后區(qū)域應(yīng)具有獨立的通風(fēng)系統(tǒng)，擴增后區(qū)域保持負壓狀態(tài)，其他區(qū)域保持常壓，防止擴增產(chǎn)物進入擴增前的區(qū)域。
PCR實驗防止污染的方法：
(一)合理分隔實驗室:將樣品的處理、配制PCR反應(yīng)液、PCR循環(huán)擴增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進行，特別注意樣本處理及PCR產(chǎn)物的鑒定應(yīng) 與其它步驟嚴格分開。zui好能劃分①標本處理區(qū);②PCR反應(yīng)液制備區(qū);③PCR循環(huán)擴增區(qū);④PCR產(chǎn)物鑒定區(qū)。其實驗用品及吸樣槍應(yīng)專用，實驗前應(yīng)將實 驗室用紫外線消毒以破壞殘留的DNA或RNA。
(二)吸樣槍:吸樣槍污染是一個值得注意的問題。由于操作時不慎將樣品或模板核酸吸入槍內(nèi)或粘上槍頭是一個嚴重的污染源，因而加樣或吸取模板核酸時要十分小心，吸樣要慢，吸樣時盡量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或產(chǎn)生氣溶膠污染。
(三)預(yù)混和分裝PCR試劑:所有的PCR試劑都應(yīng)小量分裝，如有可能，PCR反應(yīng)液應(yīng)預(yù)先配制好，然后小量分裝，-20℃保存。以減少重復(fù)加樣次數(shù)，避免污染機會。另外，PCR試劑，PCR反應(yīng)液應(yīng)與樣品及PCR產(chǎn)物分開保存，不應(yīng)放于同一冰盒或同一冰箱。
(四)防止操作人員污染，使用一次性手套、吸頭、小離心管應(yīng)一次性使用。
(五)設(shè)立適當?shù)年栃詫φ蘸完幮詫φ?，陽性對照以能出現(xiàn)擴增條帶的zui低量的標準病原體核酸為宜，并注意交叉污染的可能性，每次反應(yīng)都應(yīng)有一管不加模板的試劑對照及相應(yīng)不含有被擴增核酸的樣品作陰性對照。
(六)減少PCR循環(huán)次數(shù)，只要PCR產(chǎn)物達到檢測水平就適可而止。
(七)選擇質(zhì)量好的離心機管，以避免樣本外溢及外來核酸的進入，打開離心管前應(yīng)先離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。開管動作要輕，以防管內(nèi)液體濺出。
PCR實驗分區(qū)儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和掌上離心機等，加樣器、天平除了要專用外，還應(yīng)有定期校準。 試劑分裝應(yīng)在超凈臺中進行 擴增反應(yīng)混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級的，試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。
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