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它是原生質(zhì)體制備提取實驗老搭檔

發(fā)布時間:

2021-11-24


概要:

原生質(zhì)體制備提取實驗不能缺少老搭檔——離心機?。將酶解后的組織液過尼龍網(wǎng)膜,去除未充分消化的組織碎片,選擇與原生質(zhì)體等滲的buffer清洗原生質(zhì)體兩次,離心去除碎片(一般采取50-100 g,離心機離心1-2 min左右),最后將原生質(zhì)體重懸于適當(dāng)濃度甘露醇中??蓞⒖家韵路椒▉斫档驮|(zhì)體懸液中的碎片占比

  原生質(zhì)體制備提取實驗不能缺少老搭檔——離心機,它可以說是原生質(zhì)體制備提取實驗必備儀器了。

  原生質(zhì)體制備提取作用有五點:

  1.細胞融合。

  2.原生質(zhì)體中進行瞬時表達:亞細胞定位,蛋白和核酸相互作用。

  3.利用膜片鉗技術(shù)研究離子通道及原生質(zhì)體在受光、脅迫和激素作用后的調(diào)節(jié)機制的研究。

  4.細胞壁再生、細胞分裂與分化、攝入細胞器、病毒侵染機理、膜透性及離子轉(zhuǎn)運等基礎(chǔ)理論研究的理想材料。

  5.被用來作為研究植物細胞鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及其調(diào)節(jié)機制的理想材料。

  由此可見原生質(zhì)體純化的重要性。下面以植物為例,進行簡單講解:

  纖維素酶和果膠酶能分解植物細胞壁,形成原生質(zhì)體;加入0.6mol/l甘露醇的目的是維持原生質(zhì)體正常的形態(tài),防止原生質(zhì)體吸水脹破;不同植物細胞結(jié)構(gòu)不同,則原生質(zhì)體結(jié)構(gòu)不同;原生質(zhì)體的結(jié)構(gòu)由細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核組成。

  將酶解后的組織液過尼龍網(wǎng)膜,去除未充分消化的組織碎片,選擇與原生質(zhì)體等滲的buffer清洗原生質(zhì)體兩次,離心去除碎片(一般采取50-100 g,離心機離心1-2 min左右),最后將原生質(zhì)體重懸于適當(dāng)濃度甘露醇中。可參考以下方法來降低原生質(zhì)體懸液中的碎片占比:

  1. 提前優(yōu)化樣本,比如剝?nèi)ネ馄ぃ▋H限于研究對象不包含外皮部分的樣本)、棄去質(zhì)地堅硬的組織和損傷組織。

  2. 降低離心機離心轉(zhuǎn)速和時間,去除留在上清中的碎片。

  3. 如果原生質(zhì)體起始量足夠大,可考慮通過流式分選去除碎片。

  以上就是關(guān)于離心機在原生質(zhì)體制備提取實驗中的應(yīng)用,如果您還想了解更多有關(guān)離心機的信息,可以多多關(guān)注上海盧湘儀離心機儀器有限公司。


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