FDA注冊號：
3010704506
離心機是蛋白表達通關(guān)裝備之一
發(fā)布時間：
2020-12-17
概要：
想要通關(guān)蛋白表達少不了離心機。常言道細節(jié)決定成敗，尤其像蛋白表達提純這樣復(fù)雜的實驗。一個操作上的小失誤，可能直接影響最終結(jié)果。
雖然可以大致分為三步，表達、分離、純化，但是這個過程十分繁瑣。
蛋白表達前期還有一系列復(fù)雜過程，耗費時間也長，到最后一步，還不能放松警惕。
蛋白進行純化是通關(guān)的最后一步，選擇合適的純化方法，可以提高蛋白的純化效率，讓蛋白純化簡單便捷。常用的方法有:親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、疏水層析等。
親和層析
親和層析純化是利用生物大分子物質(zhì)具有與某些相應(yīng)的分子專一性可逆結(jié)合的特性進行蛋白純化的技術(shù)。
離子交換層析
離子交換層析是一種依據(jù)蛋白表面所帶電荷量不同進行蛋白分離純化的技術(shù)。
凝膠過濾層析
凝膠過濾(也叫排阻層析或分子篩)是一種根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法。
疏水作用層析
疏水作用層析是利用鹽-水體系中樣品分子的疏水基團和層析介質(zhì)的疏水配基之間疏水力的不同而進行分離的一種層析方法。
雖然方法多種多樣，但是，都需要用離心機來進行分離純化。
用脂肪氧合酶重組蛋白的誘導(dǎo)為例：
1.接種含有重組脂肪氧合酶蛋白的大腸桿菌BL21菌株于5 mL LB液體培養(yǎng)基中（含100 ug/mL 氨芐青霉素），37℃震蕩培養(yǎng)過夜。
2.按1∶50或1：100的比例稀釋過夜菌，一般轉(zhuǎn)接1 mL過夜培養(yǎng)物于100 mL（含100 ug/mL 氨芐青霉素）LB液體培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng)至OD600 = 0.6 - 0.8（最好0.6，大約需3 h）。取10 ul 樣品用于SDS-PAGE 分析。
3.對照組不加誘導(dǎo)劑，實驗組加入IPTG至終濃度0.5 mmol/l，37℃繼續(xù)培養(yǎng)1-3h。
4.離心機12000 rpm 離心10 min，棄上清，菌體沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。
以上就是關(guān)于蛋白表達的通關(guān)講解，本文重點就是要表達，一個實驗的成敗，細節(jié)很關(guān)鍵，雖然人工方面是可以人為把控的，但是輔助設(shè)備的細節(jié)，還是要多加注意，選一臺合適的離心機很關(guān)鍵。
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