實驗室離心機提取乳酸脫氫酶及輔酶的具體操作方法

發(fā)布時間：

2014-01-20

概要：

通過離心提取乳酸脫氫酶及輔酶用到的材料、試劑及設備有：(1)動物后腿肌肉;(2)9g/LNaCl溶液;(3)活性炭;(4)10g/L乳酸鋰溶液;(5)5g/LKCN溶液;(6)乳缽;(7)臺式離心機等

臺式離心機TD5A-WS可以應用于乳酸脫氫酶及輔酶的提取。乳酸脫氫酶，是一種不需氧脫氫酶，以輔酶I(NAD﹢)為輔酶，催化乳酸與丙酮酸的可逆的氧化還原反應。肌肉中含有大量的乳酸脫氫酶，在乳酸含量較高及氧氣充足情況下，催化乳酸生成丙酮酸，體外實驗中，為觀察方便，在隔絕空氣后以甲烯藍作為受氫體，井用固定反應中生成的丙酮酸，而使乳酸全部轉化為丙酮酸。今天我們對如何通過臺式離心機提取乳酸脫氫酶及輔酶I進行介紹。

　　通過離心提取乳酸脫氫酶及輔酶用到的材料、試劑及設備有：(1)動物后腿肌肉;(2)9g/LNaCl溶液;(3)活性炭;(4)10g/L乳酸鋰溶液;(5)5g/LKCN溶液;(6)乳缽;(7)臺式離心機TD5A-WS等

　　具體操作方法：

　　1.輔酶I(NAD﹢)的制備：取動物后腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分鐘(抑制酶的活力，防止將輔酶I破壞)，取出冷卻、剪碎，加入少許9g/LNaCl溶液及細沙用乳缽研磨成糊狀，再加9g/LNaCl溶液8ml混勻，利用臺式離心機進行離心沉淀，收集上清液，儲冰箱備用。

　　2.乳酸脫氫酶酶蛋白的提?。喝游锖笸燃∪?g置乳缽中，加入少許9g/LNaCl溶液及細砂，仔細研磨后再加9g/LNaCl溶液8ml混勻，用雙層紗布過濾，濾液加活性炭0.5g振搖數分鐘后放置半小時，并時常搖動，然后通過臺式離心機離心分離，取上清液備用。

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